Příprava bakteriologického preparátu
Bakteriologické preparáty se připravují roztěrem bakterií po podložním skle. Bakterie můžeme odebírat z jejich přirozeného prostředí (bakterie zubního hlenu) nebo z bakteriologických ploten, kde se bakterie kultivují.
Příprava materiálu
- Nástroj k odebrání - bakteriologická klička
- Podložní sklo
- Pinzeta
- Kahan
- Kapátko
- Voda
- 70% ethanol
- Bakteriologická kolonie
Odběr bakterií
Na sterilní podložní sklo kápneme vodu. Následně vysterilizujeme bakteriologickou kličku jejím rozžhavením v oxidační části plamene kahanu. Poté nadzvedneme víčko petriho misky a kličku zanoříme do agaru v místě, kde se nenachází bakterie (zchladí se). Ihned poté odebereme malý objem bakterií (stačí se dotknout kličkou v místě, kde narostla kolonie). Kličku vyjmeme z prostoru misky, kterou přiklopíme. Provedeme roztěr bkterií v kapce vody na podložním skle a necháme volně zaschnout.
Fixace bakterií
Bakterie jako takové lze jen ztěží pozorovat světelným mikroskopem, jelikož mají velmi podobný index lomu jako prostředí. Lze je pozorovat různými metodami (pozorování v temném poli), nicméně pro klasickou světelnou mikroskopii musíme bakterie obarvit.
Živé buňky nepřijímají barvivo tak dobře, jako mrtvé (fixované) buňky. Bakteriologický nátěr tedy fixujeme tak, že jej třikrát rychle protáhneme oxidační zónou plamene kahanu nátěrem nahoru. Jednou z chyb, které se dopouštějí začátečníci, je domění, že se bakterie takovým způsobem nestačí fixovat. Drží tedy preparát v plameni příliš dlouho nebo jej protahují vícekrát, což ovšem vede ke spálení a zničení vzorku.
Barvení bakteirologických preparátů
O barvení se rozepíšu v jiných kapitolách. Barvit můžeme několika způsoby:
- Negativní barvení: barvení nativních (nefixovaných preparátů)
- Univerzální barvení: obarví všechny buňky v preparátu (methylenová modř, malachitová zeleň, karbolfuchsin)
- Selektivní barvení: obarví buňky v závislosti na jejich vlastnostech (Gramovo barvení)
- Speciální barvení: barvení spór, kapsulí, flagel